Herstellungsverfahren |
Isopropylidine-Adenosin wurde in den sulphonyl (tosyl) Ester des Ptoluols durch Reaktion mit der tosyl Chlorlösung umgewandelt und et al. folgte der Methode von Clark (1951) [J. Chem. Soc. 2952]. Wegen seiner Tendenz zur Zyklisierung, wurde dem Reagens direkt es war bereit benutzt. Eine Reaktionsflasche mit Scheidetrichtern wurde, sodass das ganze System mit reinem Stickstoff evakuiert werden und gefüllt werden konnte zwei oder dreimal gegründet, um allen Sauerstoff zu beseitigen, und Reagenzien konnten dann addiert werden, als gewünscht worden, im geschlossenen System. Die Flasche enthielt hydroxocobalamin mg-700,0 in 20 ml Wasser, ein mg-Natriumborhydrid des Trichters 200,0 in 10 ml Wasser, und ein anderes machte der grobe isopropylidine Adenosin tosyl Ester von 500, mg-isopropylidine, das Adenosin in 10 ml 50% wässrigem Methanol sich auflöste. Auf Hinzufügen des Borohydrids dem Vitamin, änderte die Farbe sofort vom Rot, um zu brünieren, dann langsam zu einem grünlich-schwarzen. Nach Minute 15 wurde der isopropylidine Adenosin tosyl Ester addiert, und die Farbe änderte langsam zu einem rotbraunen. Nach 45 Minute bei Zimmertemperatur wurde Luft zugelassen und die Mischung wurde gerüttelt, um jedes restliche verringerte Vitamin B12 nachzuoxidieren. Die alkalische Lösung wurde mit verdünnter Salzsäure neutralisiert und extrahiert mit Phenolkarbontetrachlorid3:1 in den kleinen Teilen bis die wässrige Schicht war fast farblos. Die kombinierten Auszüge wurden mit Wasser gewaschen, gemischt mit ungefähr zehn Teilen Karbontetrachloridaceton10:1 und gerüttelt mit kleinen Teilen Wasser bis alle rote Farbe wurde entfernt. Das Produkt wurde durch Chromatographie auf Spalten von Zellulose des DEAES (Diäthyl- Aminoäthyl) gereinigt (3 x 1) gefolgt von (Karboxymethyl-) Zellulose cm (6 x 1), sich entwickelt mit Wasser. Die fast ganze Farbe schnell gewaschen durch Deae-Zellulose. Der Abfluss und die Wäschen wurden an der cm-Zellulosespalte angewendet, die weiter mit Wasser entwickelt wurde. Eluierung wurde solange dieser Bruch fortgesetzt, der fortgesetzt wurde, um, in insgesamt 850 ml aufzutauchen. Hälfte dieses Bruches (425 ml) wurde zu einigen ml bei vermindertem Druck konzentriert; es kristallisierte langsam, nachdem es Aceton addiert hatte, um Trübung gering zu schätzen. So wurde cobamamide erreicht. |