Reinigungs-Methoden |
Blühende gelb-orangee Nadeln von PQQ werden auf der Umkristallisierung von H2O durch Zusatz von Me2CO gebildet, oder besser von einer übersättigten wässerigen Lösung, da sie ein Acetonaddukt bildet. [Natur 280 Forrest et al. 843 1979.] ist sie auch durch Durchgang durch Wechselstrom - Rücksilikonpatrone der phase 18 oder eine silanized Kieselgelspalte in der wässerigen Lösung gereinigt worden, hingegen methoxantin hinten als rot-orange Band am Ursprung bleibt. Dieses Band wird gänzlich mit verdünntem wässrigem HCl gesammelt und gewaschen (pH 2) und wird dann mit MeOH/H2O eluiert (7: 3) und in vacuo verdunstet, um den Coenzym als roter Körper zu geben. Er ist auch gereinigt worden, indem man ihn in wässrigen 0.5M K2CO3 auflöste und gesäuert worden zu pH 2,5, hingegen PQQ als tiefroter Körper herbeiführt, der in vacuo gesammelt und getrocknet wird. Methoxantin eluiert bei 3,55 Retentionsvolumen von einer _Bondapak C18 Spalte unter Verwendung H2O/MeOH (95: 5) + 0,1% AcOH pH 4,5. Er hat UVmaximales bei 247 und 330nm (Schulter an 270nm) in H2O und maximal bei 250 und an 340nm in H2O bei pH 2,5. Mit Erregung an ex 365nm hat er eine maximale Emission an 483nm. Das NMR 13C hat?: 113,86, 122,76, 125,97, 127,71, 130,68, 137,60, 144,63, 146,41, 147,62, 161,25, 165,48, 166,45, 173,30 und 180.00ppm. Wenn eine Lösung in 10% wässriges Meco auf pH 9 mit wässrigem NH3 justiert wird und an 25o für 30minutes hielt, wird das Acetonaddukt gebildet; UV hat maximales bei 250, 317 und 360nm (H2O, pH 5,5), und mit ex an 360nm hat es maximale Fluoreszenz an maximalem an 465nm; und das NMR 13C [(CD3) 2SO, TMS] hat?: 29,77, 51,06, 74,82, 111,96, 120,75, 121,13, 125,59, 126,88, 135,21, 139,19, 144,92, 161,01, 161,47, 165,17, 168,61, 190,16 und 207.03ppm. Es bildet auch ein Methanoladdukt. Wenn es mit Me2SO4/K2CO3 in trockenem Me2NCHO an 80o für 4hours reagiert wird, bildet es den Trimethyl- Ester, der m 265-267o (Dezember) [260-263o (Dezember) auch berichtet] nach Rekristallisation von heißem MeCN (orange Kristalle) mit UVmaximalem bei 252 und 344nm (H2O) und 251, 321 und 373nm hat (in MeOH; MeOH-Addukt). [Duine et al. Eur J Biochemie 108 187 1980, Adv-Enzymologie 59 Duine et al. 169 1987, Corey u. Tramontano J morgens Chem Soc 103 5599 1981, Gainor u. Weinreb J Org Chem 46 4319 1981, Hendrickson u. de Vries J Org Chem 17 1148 1982, McKenzie et al. J Chem Soc, Chem Commun 1372 1983.] |